紫外光分光光度計使用,使用前儀器要調零、調百校準,參比溶液又稱空白溶液.測量時用作比較的、不含被測物質但其基體盡可能與試樣溶液相似的溶液.通常,用參比溶液掃描的曲線應是一條平坦的直線.有時,基體中雖不含被測物質,但含有別的物質,這時必須保證其不影響測試.經常碰到的是試劑空白中含有被測物質,此時必須經過純化將其除去.否則將影響測定結果.在色譜分析中,有時基體中可能存在一個以上的和被測組分相距較遠的色譜峰,計算機在數據處理中不會計入它們,不影響測定.
使用方法:開機步驟
1 開光譜儀電源
2 開計算機電源
3 在文件管理器中用鼠標指按UV WinLab圖標,此時出現UV WinLab的應用窗口,儀器已準備好,可選用適當方法進行分析操作。
2 方法:在分析中必須對分光光度計設定一些必要的參數,這些參數的組合就形成一個“方法”。Lambda系列UV WinLab軟件預設四類常用方法。
1)掃描(SCAN),用以進行光譜掃描。
2)時間驅動(TIME DRIVER),用以觀察一定時間內某種特定波長處縱坐標值的變化,如酶動力學。
3)波長編程(WP)用以在多個波長下測定樣品在一定時間內的縱坐標值變化,并可以計算這些縱坐標值的差或比值。
4)濃度(CONC)用以建立標準曲線并測定濃度。
2.1 進入所需方法,在方法窗口中選擇所需方法的文件名。
2.2 方法的設定
2.2.1 掃描、波長編程及時間驅動
各項方法可根據顯示的參數表,逐項按需要選用或填入,并可參考提示。
2.2.2 濃度
濃度方法窗口下方標簽較多,說明做濃度測定時需要參數較多。用鼠標指按每一標簽,可翻出下頁,其上有一些需要測定的參數。必須逐頁設定。
3 工具條
3.1 SETUP
當所需的各項參數都已在參數中設好后,必須用鼠標指按SETUP,才能將儀器調整到所設狀態。
3.2 AUTOZERO
用鼠標指按此鍵,分光光度計即進行調零(在光譜掃描中則進行基線校正)。
3.3 START
用鼠標指按此鍵,光度計即開始運行所設定的方法。
4 方法運行
4.1 掃描,時間驅動,波長編程
方法選好后,先放入參比溶液,按AUTOZERO鍵,進行自自動校零或背景校正結束后再放入樣品,按START,分光光度計即開始進行,同時屏幕上出現圖形窗口,將結果顯示出來。
4.2 濃度
4.2.1制訂標準曲線
1 方法選好后,確認各項數據正確,特別是REFS頁中第一行要選中右上角的“edit mode”。再放入參比溶液,按AUTOZERO鍵自動校零或背景校正。
2 按setup,待該圖標消失后,再按“start”,按提示依次放入標準色列的各管溶液,每次都按提示進行操作。
3 標準色列測定
完畢后,屏幕上出現calibgraphwindow,顯示擬合的標準線,并標出各項標準管的位置,屏幕下方還有一條Concentration mode的對話框,可以用來修改擬合的曲線類型(按 change calbration),或修改標準溶液的任何一管(replace),或取消某一管(delete),或增加標準溶液管數(add)。如過已經滿意,則按analyse sample鍵,進入樣品測定窗口。
4 標準曲線有關的各項數據,均在calibresultwindow中,可用鼠標將其調出觀察。其中包括每個標準溶液的具體數據,標準曲線的回程方程式,相關系數,殘差。
4.2.2樣品濃度測定
4.2.2.1剛制定好的標準曲線接著進行樣品濃度測定時
1 只需在concentration mode對話框按analyse sample鍵,進入樣品測定窗口。
2 按設定的樣品順序放入各樣品管,每次按提示進行操作。
3 屏幕上出現結果窗口,結果數據將依次顯示在樣品表中的相應位置。
4.2.2.2利用原有的標準曲線接著進行樣品濃度測定時
4.2.2.2.1 調出所測定樣品的濃度方法文件,首先調出refs頁,將原設edit mode選項取消,改設左上角的using exiting
calibration。重新將方法存盤,則今后再調用時即不需再作修改。
4.2.2.2.2 在sample頁中按要求重設各種樣品名稱機樣品信息。
4.2.2.2.3 按工具條中setup鍵,將主機設到該方法所設定的條件。
4.2.2.2.4 將參比溶液放入比色室,按autozero鍵做背景校零。
4.2.2.2.5 按start鍵,按設定的樣品順序放入各樣品管,每次按提示進行操作。
4.2.2.2.6 屏幕上出現結果窗口,結果數據將依次顯示在樣品表中相應位置。
分光光度計的使用方法
1)預熱儀器。為使測定穩定,將電源開關打開,使儀器預熱20min,為了防止光電管疲勞,不要連續光照。預熱儀器時和在不測定時應將比色皿暗箱蓋打開,使光路切斷。
2)選定波長。根據實驗要求,轉動波長調節器,使指針指示所需要的單色光波長。
3)固定靈敏度檔。根據有色溶液對光的吸收情況,為使吸光度讀數為0.2-0.7,選擇合適的靈敏度。為此,旋動靈敏度檔,使其固定于某一檔,在實驗過程中不再變動。一般測量固定在“1”檔。
4)調節“0”點。輕輕旋動調“0”電位器,使讀數表頭指針恰好位于透光度為“0”處(此時,比色皿暗箱蓋是打開的,光路被切斷,光電管不受光照)。
5)調節T=100%。將盛蒸餾水(或空白溶液或純溶劑)的比色皿放入比色皿座架中的第一格內,有色溶液放在其它格內,把比色皿暗箱蓋子輕輕蓋上,轉動光量調節器,使透光度T=100%,即表頭指針恰好指在T=100%處。
6)測定。輕輕拉動比色皿座架拉桿,使有色溶液進入光路,此時表頭指針所示為該有色溶液的吸光度A。讀數后,打開比色皿暗箱蓋。
7)關機。實驗完畢,切斷電源,將比色皿取出洗凈,并將比色皿座架及暗箱用軟紙擦凈。