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梅君潔
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1、選擇合適的超濾離心管，主要考慮MWCO和濃縮體積，最常見的是Ultra-15(10kD)。到底選擇多大截留分子量比較合適呢？10kDa、5kDa、還是30kDa？通常應截留分子量不應大于目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量為35kDa，就可以選擇10kDa截留分子量的超濾離心管。若目的蛋白分子量為10kD左右，則可以用截留分子量3kD的超濾離心管。認真閱讀使用說明書，注意超濾膜對各種化學物質的耐受程度有所不同，表格中有。
2、新買來的超濾是干燥的，使用前加入MilliQ水，水量完全過膜，冰浴或冰箱里預冷幾分鐘。然后將水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超過管頂的白線為準。操作要輕，加入蛋白液前，超濾離心管需要插在冰上預冷。
3、平衡。質量和重心二者都要達到平衡。注意轉速和加速度不可太快，否則直接損壞超濾膜。開始離心超濾(離心機預冷至4度)。不同離心機的轉速rpm換算成g之后，有所不同。具體可參閱附件里的說明書。離心機的加速度調至最低檔，減小對膜的壓力。注意，一定要等離心機達到目的轉速之后，方可離開離心機，否則離心機出問題時，無法第一時間處理，后果不可預測！膜與轉軸的方向根據說明書調整(角轉離心機的情況是膜與軸垂直)。在實際使用中，一般轉速開的比說明書里的要低，這樣可以延長離心管的使用壽命。
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不知道
回答數：33900 | 被采納數：42
(1)選擇合適的超濾管。通常應截留分子量不應大于目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量為35kDa，就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。若目的蛋白分子量為10kD左右，則可以用截留分子量3kD的超濾管。認真閱讀使用說明書，注意超濾膜對各種化學物質的耐受程度有所不同。
(2)新買來的超濾是干燥的，使用前加入超純水，水量完全過膜，冰浴或冰箱里預冷幾分鐘。然后將水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超過管頂的白線為準。操作要輕，加入蛋白液前，超濾管需要插在冰上預冷。
(3)平衡。質量和重心二者都要達到平衡。注意轉速和加速度不可太快，否則直接損壞超濾膜。開始離心超濾(離心機預冷至4度)。不同離心機的轉速 rpm換算成g之后，有所不同。離心機的加速度調至最低檔，減小對膜的壓力。注意，一定要等離心機達到目的轉速之后，方可離開離心機，否則離心機出問題時，無法第一時間處理。膜與轉軸的方向根據說明書調整(角轉離心機的情況是膜與軸垂直)。在實際使用中，一般轉速開的比說明書里的要低，這樣可以延長離心管的使用壽命。
(4)當濃縮到剩下1ml時，取50ul緩沖溶液，加入10ul流穿，看有沒變藍色，以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了，將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾。要精確判斷是否漏管，用5mgml的BSA離心10min，再取流穿，跑蛋白膠或Bradford粗測，繼續加入剩下的蛋白液濃縮(在冰上操作，防止蛋白受熱)，直到所有濃縮液都加完為止。離心過程中注意是否發生蛋白沉淀，導致堵管。若發生沉淀，要確定沉淀的具體原因，是蛋白濃度過高還是Buffer不合適；前者可用多根超濾管同時超濾，降低濃度的辦法解決，后者的方法是換不同的緩沖溶液，直到蛋白不發生沉淀為止。
(5)前面幾步用以濃縮蛋白，如果要換Buffer，在總蛋白液濃縮至1ml左右的時候，輕輕加入新的Buffer(經0.22um超濾膜超濾)，再 濃縮至1ml左右，連續三次，最后一次的濃縮終體積根據需要的蛋白濃度而定，一般不多于500ul，也有濃縮至200ul以內的情況。按照每次至少10倍左右的體積濃縮算，三次達到1000倍以上，基本上可以達到換buffer的目的。
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周向平愛吉他
回答數：17825 | 被采納數：15
離心管就是一個簡單的可以承受高轉速壓力的管子，比如離一些樣品，分離出上清沉淀。
離心超濾管會有一個類似于內管和外管的兩個部分，內管中是帶有一定分子量的膜，當高速離心時，分子量比它小的就漏到下面的管子(即外管)中了，分子量比它大的就截留在上面(即內管中)，就是超濾的原理。。。。常用于濃縮樣品。
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誰隨隋
回答數：1775 | 被采納數：3
超濾管使用方法和注意事項
蛋白濃縮和換
Buffer
通常使用的超濾管，常用
Millipore
的
Amicon-Ultra-15
超濾管
(
MWCO10kD
)。也有其它型號的、不同體積大小和
MWCO
超濾管可選，視目的蛋白的分子量
與濃縮前體積、濃縮目標體積而定。可重復使用。
1
、
選擇合適的超濾管，
主要考慮
MWCO
和濃縮體積，
通常應截留分子量不應大于目的蛋
白分子量的
1/3
，比如目的蛋白分子量為
35kDa
，就可以選擇
10kDa
截留分子量的超濾管。
若目的蛋白分子量為
10kD
左右，則可以用截留分子量
3kD
的超濾管。
2
、
新買來的超濾是干燥的，
使用前加入
MilliQ
水，
水量完全過膜，
冰浴或冰箱里預冷
幾分鐘。然后將水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超過管頂的白線為準。操作要
輕，加入蛋白液前，超濾管需要插在冰上預冷。
3
、平衡。質量和重心二者都要達到平衡。注意轉速和加速度不可太快，否則直接損壞
超濾膜。開始離心超濾(離心機預冷至
4
度)。膜與轉軸的方向根據說明書調整(角轉離心
機的情況是膜與軸垂直)
。
在實際使用中，
一般轉速開的比說明書里的要低，
這樣可以延長
離心管的使用壽命。
4
、當濃縮到剩下
1ml
時，
【取
50ul
國產
Bradford
溶液，加入
10ul
流穿，看有沒變藍
色，以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了，將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾。
要精確判斷是否漏管，
用
5mg/ml
的
BSA
離心
10min
，
再取流穿，
跑蛋白膠或
Bradford
粗測】
，
繼續加入剩下的蛋白液濃縮(在冰上操作，防止蛋白受熱)，直到所有濃縮液都加完為止。
離心過程中注意是否發生蛋白沉淀，
導致堵管。
若發生沉淀，
要確定沉淀的具體原因，
是蛋
白濃度過高還是
Buffer
不合適；前者可用多根超濾管同時超濾，降低濃度的辦法解決，后
者的方法是換不同的
Buffer
，直到蛋白不發生沉淀為止。
5
、前面幾步用以濃縮蛋白，如果要換
Buffer
，在總蛋白液濃縮至
1ml
左右的時候，輕
輕加入新的
Buffer
(經
0.22um
超濾膜超濾)，再濃縮至
1ml
左右，連續三次，最后一次的
濃縮終體積根據需要的蛋白濃度而定，一般不多于
500ul
，也有濃縮至
200ul
以內的情況。
按照每次至少
10
倍左右的體積濃縮算，三次達到
1000
倍以上，基本上可以達到換
buffer
的目的。
6
、取出最終蛋白濃縮液的操作在冰上操作，用黃槍頭(
200ul
)取，輕輕順著邊緣插入
槍頭，
輕輕吹打、
混勻蛋白液，
注意不要碰到超濾膜，
然后吸取濃縮液，
每次吸接近
200ul
，
直到吸完。
管底剩下的最后一點濃縮液不必吸取，
否則難度太大，有可能損壞超濾膜。
最后
加入
MilliQ
水到超濾管中，沒過超濾膜，防止膜失水變干。
7
、以下是處理超濾管，重復利用超濾管的步驟。
8
、倒出超濾管里的水，用
milliQ
水輕輕潤洗幾次，
【若管底有可見的蛋白沉淀，可以
先加入水，然后用槍頭吹打，注意不要碰到膜，吹打至沉淀懸起，然后倒掉，不可用自來水
猛沖】然后加入
0.2M
的
NaOH
溶液，室溫放置
20min
，期間平衡超濾管。再離心
10min
。倒
出殘留的
NaOH
溶液，將管芯浸入
MilliQ
水的燒杯
(1
或
2L)
中
,
放置幾個小時
,
再換新的水
,
放置幾個小時，不斷稀釋
NaOH
濃度。
50ml
管和蓋子用自來水洗，內壁再用
MilliQ
水洗干
凈。
9
、取出浸沒的管芯，加至接近滿的
MilliQ
水，
50ml
管也加滿
MilliQ
水，將管芯慢慢
放入
50ml
離心管，排出部分水，然后蓋上蓋子，放
4
度保存，直到下次使用。一般來說，
按照上述步驟和注意事項，每根管用三四年不會壞。
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hua遠2015
回答數：21660 | 被采納數：32
方法如下：法一：離心收集管，倒轉濾膜放置方向，加入所需體積的目的溶劑，放置一會離心即可。法二：用硫酸胺沉淀得到IgG,需要透析至無NH4, 再冰凍干燥即可。希望可以幫助到您。
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1292661638ll
回答數：935 | 被采納數：1
倒出超濾管里的水，用milliQ水輕輕潤洗幾次，【若管底有可見的蛋白沉淀，可以先加入水，然后用槍頭吹打，注意不要碰到膜，吹打至沉淀懸起，然后倒掉，不可用自來水猛沖】然后加入0.2M的NaOH溶液，室溫放置20min，期間平衡超濾管。再離心10min。倒出殘留的NaOH溶液，將管芯浸入MilliQ水的燒杯(1或2L)中,放置幾個小時,再換新的水,放置幾個小時，不斷稀釋NaOH濃度。50ml管和蓋子用自來水洗，內壁再用MilliQ水洗干凈，再取出浸沒的管芯，加至接近滿的MilliQ水，50ml管也加滿MilliQ水，將管芯慢慢放入50ml離心管，排出部分水，然后蓋上蓋子，放度保存。
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